标记档案: 体细胞突变

MedWire新闻:研究人员已经确定了起泡性皮肤障碍寻常型天疱疮(PV)患者血清中发现的自身抗体的主要目标。

PV患者发展抗蛋白质桥粒芯蛋白(DSG)1和3的抗体,帮助表皮细胞粘在一起并保持皮肤的完整性,在皮肤和粘膜上引起疼痛的起泡。

Giovanna Zambruno(意大利罗马Istituto Dermopatico dell'Immacolata)及其同事发现,DSG3细胞外结构域(EC)1的顺式粘附界面是患者血清中产生的PV自身抗体(A)224的主要靶标PV。

现有的治疗方法针对整个免疫系统,但这可能会导致副作用问题,并可能导致患者容易受到感染。

为了更准确地查明PV中自身抗体产生的触发点,Zambruno和团队从两名患有该病症的患者中分离出对DSG15特异性的3免疫球蛋白(Ig)G抗体。

其中,在小鼠被动转移模型中表达时,实验室中有三层皮肤细胞被破坏,两层是致病的。

将由病原性PV抗体识别的表位分离到DSG3 EC1和EC2子结构域,并且使用特定的血清学测定将PVA224的靶定位为EC1上的顺式粘附界面。

研究人员认为PV中所见的自体反应性是由于DSG3以外的抗原产生的体细胞突变造成的,因为当体细胞突变回复到生殖系序列时,与DSG3的结合消失。

“确定致病性抗体所针对的免疫优势区域对PV的诊断有重要意义,并为建立治疗PV患者的治疗方法开辟了新的视角”,Zambruno和 临床研究杂志.

“最后,种系的PV自身抗体可能导致最终导致这种危及生命的疾病发展的抗原的鉴定。

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寻常型天疱疮(PV)是由桥粒核心糖蛋白(DSG)家族蛋白DSG3和DSG1的自身抗体引起的皮肤和粘膜自身免疫性起泡性疾病,导致角质形成细胞粘附丧失。 为了解更多关于致病性PV自身抗体的信息,我们从15 PV患者中分离出对DSG3特异性的2 IgG抗体。 三种抗体在体外破坏角质形成细胞单层,并且2在新生小鼠的被动转移模型中是致病的。 由致病性抗体识别的表位被映射到DSG3细胞外1(EC1)和EC2子域,涉及顺式 - 粘附相互作用的区域。 使用特定位点的血清学测定,我们发现EC1上由病原性抗体PVA224识别的顺式粘合界面是PV患者血清中存在的自身抗体的主要靶标。 分离的自身抗体使用不同的重链和轻链可变区基因,并在互补决定区携带高水平的体细胞突变,与抗原选择一致。 值得注意的是,当体细胞突变恢复到生殖系序列时,与DSG3的结合丧失了。 这些发现确定了DSG3的顺式粘合界面作为PV中致病性抗体靶向的免疫显性区域,并且表明自体反应性依赖于对与DSG3无关的抗原的应答中产生的体细胞突变。

寻常型天疱疮(PV)是由自身抗体引起的皮肤和粘膜的致命性自身免疫性起泡性疾病,所述自身抗体结合到桥粒的主要成分 - 钙粘蛋白型细胞 - 细胞粘附分子桥粒核心糖蛋白3(DSG3)和DSG1,角质化细胞粘附的丧失。 自身抗体在PV发病机制中的关键作用得到以下观察结果的支持:疾病活性与抗DSG3抗体滴度相关,具有活性PV的母亲的新生儿显示由母体抗体的胎盘转移引起的起泡,并且天疱疮样病变是通过被动转移来自PV患者的抗DSG3 IgG来诱导新生小鼠。

在皮肤中,DSG3主要在基底层和基底层中表达,而DSG1主要在上表皮层中表达。 相反,在非角化的层状上皮如口腔粘膜中,DSG3在整个上皮中高度表达,而DSG1在更低的水平表达。 DSG1和DSG3的差异表达模式负责天疱疮的临床变体:针对DSG3的抗体以粘膜形式存在,而针对DSG3和DSG1的抗体与皮肤粘膜病变相关。

DSG3是一种钙结合膜糖蛋白,具有包含5不同亚结构域(EC1-EC5)的胞外结构域,并且以前蛋白的形式合成,其在高尔基体中通过除去前肽而转运至细胞表面之前进行处理。 前肽的切割发生在EC1亚结构域中保守色氨酸残基的上游,揭示了在相对细胞上与DSG3形成同嗜性相互作用的关键残基。 几项研究显示,PV血清中的多克隆抗体主要与EC3和EC1子域(氨基酸2-1)中的DSG161的氨基末端反应。

致病性单克隆抗体的分离有助于解决引起PV患者自身反应性反应并驱动水疱形成的机制的问题。 从活性小鼠PV模型中分离的Amagai及其合作者AK23,其通过与参与形成跨粘合界面的DSG1的EC3子域结合而导致细胞粘附丧失。 许多人类抗DSG致病性和非致病性单克隆抗体被分离为来自PV患者的单链可变区片段(scFv)。 与AK23 mAb类似,这些人抗体的致病活性被映射到被前肽掩蔽的EC1的氨基末端区域。 总之,人类和小鼠的数据表明致病性抗体主要与EC1结合,并通过干扰DSG3的跨膜粘附界面来破坏角质形成细胞粘附。

在这项研究中,我们从2 PV患者中分离出几种与DSG3结合的IgG自身抗体。 这些抗体带有与DSG3结合所需的高水平的体细胞突变。 被3致病性抗体识别的表位被映射到预期涉及顺式 - 粘附相互作用的区域中的EC1和EC2子结构域。 发现该区域是PV患者血清自身抗体的主要靶标。 这些结果将顺式 - 粘附界面确定为PV中致病性抗体所靶向的免疫显性区域,并且表明自体反应性依赖于由不相关抗原触发的体细胞突变。

全文可在: http://www.jci.org/articles/view/64413